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木糖葡萄球菌實時熒光定量PCR檢測方法的建立及其應(yīng)用
新聞來源:CEIDI西遞 發(fā)布時間:2024-04-22

目的 本研究擬建立一種靈敏快速的實時熒光定量 PCR(real?time quantitative PCR, qPCR)方法,用 于檢測大、小鼠木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus, S. xylosus)。>>>商務(wù)洽談,點此處,在線咨詢

方法 本研究選擇特異性 gehM 基因片段作為靶 標(biāo)合成了一套引物,建立了木糖葡萄球菌檢測的 qPCR 方法。 對木糖葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株和其他非目標(biāo)菌進行特異 性分析。 將木糖葡萄球菌的 DNA 進行 10 倍稀釋測定其靈敏度。 用送檢的樣本進行了臨床應(yīng)用并測序驗證,同時 與培養(yǎng)法進行比較。


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結(jié)果 僅木糖葡萄球菌出現(xiàn)特異性擴增曲線,而其他非目標(biāo)菌未出現(xiàn),表明設(shè)計的引物對木 糖葡萄球菌具有特異性,靈敏度為 100 fg / μL,組內(nèi)和組間重復(fù)性均小于 3%。 共檢測 60 份臨床樣品,有 5 份樣品擴 增曲線為典型的 S 曲線,將該 qPCR 產(chǎn)物克隆測序并進行同源性比對,該序列與木糖葡萄球菌的同源性為 99.63%, 表明該樣本木糖葡萄球菌核酸陽性,所檢測樣本陽性率為 8.3%,而培養(yǎng)法的陽性率為 6.7%,qPCR 方法陽性檢出 率比培養(yǎng)法略高。

結(jié)論 建立的木糖葡萄球菌 qPCR 方法,具有快速、靈敏度高、特異性強和重復(fù)性好的優(yōu)點,可用 于實驗動物木糖葡萄球菌的檢測。

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